若年マウス（5-9週齢）と老齢マウス（18ヶ月齢以降）の脾臓、腸管膜リンパ節、パイエル板、小腸、大腸各臓器における免疫細胞を採取し、フローサイトメトリーを用いて、T細胞分画の割合と、老化T細胞に特徴的とされる表面マーカーの変化を解析したところ、脾臓やリンパ組織、大腸と比較し、小腸の上皮間リンパ球（Intraepithelial lymphocytes; IEL）^※２で最も大きな変化がみられました。老齢マウスの小腸において、CD4⁺分画の割合が著明に増加し、老化T細胞の特徴である共刺激分子CD27及びCD28の発現低下がみられました。よって、小腸IEL-CD4に着目し、脾臓のCD4⁺ T細胞を全身免疫系の比較対象として、若年と老齢マウスよりそれぞれの分画をフローサイトメーターにより分取し、増殖能を比較しました。老化IEL-CD4の増殖能は、全身免疫系の老化T細胞と比較して著しく低下しました。マイクロアレイによる網羅的遺伝子発現解析では、老化IEL-CD4において、炎症性サイトカイン^※３の上昇はみられず、Cd8αやNK受容体、グランザイムといった細胞障害性T細胞マーカーの上昇がみられました。そこで、腸管腫瘍由来オルガノイド^※４とIEL共培養モデルを用いて抗腫瘍免疫能を検討しました。腸管腫瘍を自然発症するAPCminマウスの腸管腫瘍からオルガノイドを作成し、若年マウスおよび老齢マウスの小腸IEL-CD4⁺ T細胞、CD3⁺ T細胞と共培養し、細胞障害能を検討したところ、老化IELは若年IELよりも小腸腫瘍オルガノイドに対する高い細胞障害活性を有していました。さらに老化T細胞を細分化し、1細胞レベルの特性を精密に検討する目的で、若年と老齢マウスの小腸IEL、脾臓よりそれぞれCD3陽性T細胞を分取し、シングルセルRNAシークエンス^※５を行ないました。脾臓のＴ細胞において老齢マウスでナイーブ^※６からメモリーT細胞^※７への移行がみられる一方で、小腸では若年マウスでほとんどみられないCD8α⁺CD4⁺のT細胞分画が老齢マウスにおいて出現しました（図１）。