Vector Info
当研究室が作製しNature Protocols誌とNature Methods誌に発表した便利なGateway® Vectorを紹介します．
GATEWAYシステムによる発現ベクターの作製法
Nature Protocols, 2010より一部改変
図は、私たちの研究室で主に用いている、C末端側に蛍光タンパク質を融合させる発現ベクターの作製法です．
興味のあるゲノムDNA断片あるいはcDNA断片をpENTR-L1/R5 Vectorにクローニングすれば、プロモーターを組み込んだpDEST Vectorと各種蛍光タンパク質を組み込んだpENTR-L5/L2 Vectorとの間で相同組換え反応を１回行うだけで、実験の目的に合ったさまざまな発現ベクターを容易に作製することができます．
この相同組換え反応は、InvitrogenのMultisite Gateway Systemを利用しています．
Gateway Systemについての詳細はInvitrogenのホームページを参照してください．
興味のあるゲノムDNA断片あるいはcDNA断片をpENTR-L1/R5 Vectorにクローニングすれば、プロモーターを組み込んだpDEST Vectorと各種蛍光タンパク質を組み込んだpENTR-L5/L2 Vectorとの間で相同組換え反応を１回行うだけで、実験の目的に合ったさまざまな発現ベクターを容易に作製することができます．
この相同組換え反応は、InvitrogenのMultisite Gateway Systemを利用しています．
Gateway Systemについての詳細はInvitrogenのホームページを参照してください．
文献
Kuroyanagi H, Kobayashi T, Mitani S, Hagiwara M.
Transgenic alternative-splicing reporters reveal tissue-specific expression profiles and regulation mechanisms in vivo.
Nature Methods. 3: 909-915, 2006.
Kuroyanagi H, Ohno G, Sakane H, Maruoka H, Hagiwara M.
Visualization and genetic analysis of alternative splicing regulation in vivo using fluorescence reporters in transgenic Caenorhabditis elegans.
Nature Protocols. 5: 1495-1517, 2010.
Transgenic alternative-splicing reporters reveal tissue-specific expression profiles and regulation mechanisms in vivo.
Nature Methods. 3: 909-915, 2006.
Kuroyanagi H, Ohno G, Sakane H, Maruoka H, Hagiwara M.
Visualization and genetic analysis of alternative splicing regulation in vivo using fluorescence reporters in transgenic Caenorhabditis elegans.
Nature Protocols. 5: 1495-1517, 2010.
謝辞
ここで紹介しているVectorの作製には、次の方々からご供与いただいたマテリアルを利用しています．
Andrew Fire (Stanford Univ)
Atsushi Miyawaki (RIKEN)
Masaaki Muramatsu (TMDU)
Roger Y. Tsien (UC, San Diego)
Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Clontech
Invitrogen
TaKaRa
Andrew Fire (Stanford Univ)
Atsushi Miyawaki (RIKEN)
Masaaki Muramatsu (TMDU)
Roger Y. Tsien (UC, San Diego)
Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Clontech
Invitrogen
TaKaRa
pDESTシリーズは、各種発現ベクターを作製するためのプロモーターと3'カセットを供給します．
pENTRシリーズは、各種蛍光タンパク質（融合タンパク質）発現ベクターを作製するための蛍光タンパク質cDNAカセットを供給します．