ApoE欠損マウスに高脂肪食負荷を行うと大動脈における粥状動脈硬化巣が著明に形成されますが、血漿FXa活性も有意に上昇することが確認できました。マウスにおいて効果的にFXa活性を抑制することのできるリバーロキサバン投与量120mg/kg/dayをこのモデルに投与したところ、血漿FXa活性は有意に低下し、粥状動脈硬化巣も有意に縮小しました。次に、粥状動脈硬化巣に存在するマクロファージ内のオートファジー活性を検討しました。マクロファージ内のオートファゴソーム数を評価したところ、リバーロキサバンを投与した高脂肪食負荷ApoE欠損マウス群では非投与群と比較してオートファゴソーム数が有意に増加していました。また、培養マクロファージ（＝RAW 264.7細胞）に粥状硬化誘導物質7-ketocholesterol（7KC）を添加するとマクロファージにおけるオートファジーが活性化されましたが、FXaを添加するとmTORのリン酸化が促進され、オートファジー活性が抑制されました。さらにリバーロキサバンを追加すると、FXaによるmTORのリン酸化は抑制され、オートファジー活性が回復しました。私たちの研究グループは、さらに高脂肪食負荷ApoE欠損マウス内の粥状動脈硬化巣に発現しているインフラマソームの主要構成タンパクNLRP3の発現量がリバーロキサバン投与によって著明に減少することを見出しました。そして、7KC処理した培養マクロファージにFXaを添加するとNLRP3タンパク量ならびにインフラマソームの活性化で放出されるIL-1β発現量が亢進し、ここにリバーロキサバンを投与すると、これらの発現は抑制されることも見出しました。ここまで見てきたFXaとオートファジーやインフラマソームの活性化の関わりにPAR-2が関与しているのかどうかを検討するため、PAR-2欠損マクロファージを用いた検討を行いました。7KC処理を行うと野生型マクロファージと同様にオートファジーの活性化が生じたものの、FXaを添加してもmTORのリン酸化、オートファジー活性の抑制、インフラマソーム活性の亢進は起こりませんでした。PAR-2の関与については動物実験でも検討を行いました。その結果、高脂肪食を負荷したApoEとPAR-2遺伝子の二重欠損マウスの大動脈における粥状動脈硬化巣の面積は高脂肪食負荷ApoE欠損マウスと比較して有意に低下していましたが、リバーロキサバンを投与した高脂肪食負荷ApoE欠損マウスほどは低下しておらず、FXaを介した動脈硬化促進作用はPAR-2を介した経路にとどまらないことを示唆する結果となりました。また、高脂肪食を負荷したApoEとPAR-2遺伝子の二重欠損マウスにオートファジー阻害物質であるクロロキンを投与したところ、非投与の場合と比較して大動脈における粥状動脈硬化巣の面積が増大し、PAR-2を介した動脈硬化促進作用はオートファジー抑制作用が関与していることが示される結果となりました。

伊藤 祐輔（イトウ　ユウスケ） Ito Yusuke
国家公務員共済組合連合会 東京共済病院
循環器科 医長
・研究領域
循環器疾患（虚血性心疾患、動脈硬化症、心不全）の基礎/臨床研究